即用型SABC-POD(兔IgG)



产品货号SA1022  
产品名称即用型SABC-POD(兔IgG)  
价格规格290元/1/2盒(可以做80张左右的切片);550元/1盒(可以做160张左右的切片)  
保存条件4℃可保存一年,应避免冷冻。  
试剂盒内容:

1.3% H2O2。12ml。去除内源性过氧化物酶。

2.5%BSA 封闭液:12ml。用于组织切片的封闭。

3.二抗:12ml。生物素标记山羊抗兔IgG。
4.SABC:12ml。采用博士德所研究的独特方法生产,复合物不仅有很强的信号放大作用,而且也非常稳定。  


Instructions

工作原理

SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC 即StreptAvidin—BiotinComplex,。根据研究,SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。

实验客户需自备试剂:

1. 粘片剂APES(AR0001)或POLY-L-LYSINE(AR0003)。

2. EDTA修复液(AR0023)。

3. 0.02M PBS(pH7.2-7.6)配法:1000ml蒸馏水中加氯化钠9g, Na2HPO4·12H2O 7g,NaH2PO4·2H2O 0.5g。

4. 0.01M枸橼酸盐缓冲液(AR0024):1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)3g,枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。

5. DAB显色试剂盒(AR1022)。

A.石蜡片热修复染色步骤:

1. 石蜡切片,常规脱蜡至水。

2. 3% H2O2去离子水室温孵育5-10min,以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(AR0030)冲洗,5min×3次。

3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。

4. 热修复抗原:将切片浸入到EDTA修复液中,微波炉加热到沸腾后断电,间隔5-10min再修复1-2次,冷却。

5. 滴加5% BSA封闭液37℃孵育30min,甩干,勿洗。

6. 滴加适当稀释的一抗,37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5min×3次。

7. 滴加生物素标记山羊抗兔IgG,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。

8. 滴加SABC,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。

9. 显色:镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (AR1022)或AEC (AR1020)。自来水充分冲洗。

10. 苏木素(AR0005)复染,染色时间为0.5-2min。脱水,透明。

11. 选用中性树胶,水溶性封片剂(AR1018)或其他适当的封片剂封片。

B.石蜡片酶消化染色步骤:

将A程序的第4步:滴加酶消化液室温5-10min。酶修复可选用复合修复液(AR0022)、胰蛋白酶(AR1007)、胃蛋白酶(AR1008)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。

C.石蜡切片酶不消化/修复程序:

对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A程序中的第4步即可。

D.细胞片的染色步骤:

1.爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine),灭菌,备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1-2天,使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片,使细胞贴附。

2.固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。

3.打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。(若采用丙酮固定则此步骤可省略)

4.酶消化处理室温5-10min。酶消化可选用复合修复液(AR0022)、胰蛋白酶(AR1007)、胃蛋白酶(AR1008)。蒸馏水洗2min×3次。

5.滴加5% BSA封闭液37℃孵育30min,甩干,勿洗。

6.滴加适当稀释的一抗,37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5min×3次。

7.滴加生物素标记山羊抗兔IgG,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。

8.滴加SABC,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。

9显色:镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (AR1022)或AEC (AR1020)。自来水充分冲洗。

10.苏木素(AR0005)复染,染色时间为0.5-2min。

11.选用中性树胶,水溶性封片剂(AR1018)或其他适当的封片剂封片。




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